菊花很美， 但其害虫较多， 利用基因工程培育抗虫菊花是害虫防治的有效手段。 胰蛋白酶抑制剂能干扰昆虫的代谢， 引起昆虫死亡， 但对人体无害。 科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因（Pin﹣ Ⅱ ）通过农杆菌导入菊花细胞， 培育成了抗虫菊花。 图 1 表示含目的基因的 DNA 分子， 图 2 表示质粒， 图中Ampr 表示氨苄青霉素抗性基因， Neor 表示新霉素抗性基因， 复制原点是质粒 DNA 复制的起点， 使其能在受体细胞中存在和遗传。 箭头表示识别序列完全不同的 4 种限制酶的酶切位点。 请回答下列有关问题：
（1） 上述基因工程中， 受体细胞是______________， 属于__________（填“动物”“植物”或“微生物”） 基因工程。
（2） 为使目的基因与质粒高效重组， 最好选用_______________（限制酶） 作用于含目的基因的 DNA 和质粒， 然后在___________的作用下形成重组质粒。
（3） 用农杆菌感染时， 应优先选用菊花___________（填“受伤的”或“完好的”） 叶片与含重组质粒的农杆菌共培养， 选用这种叶片的理由是_________________________________。 成功导入重组质粒的细胞会表现为______________________________。
（4） 用转基因菊花叶片喂养某种菊花害虫， 发现害虫死亡率显著增加。 试从分子水平写出转基因和非转基因菊花的叶片细胞的不同点： ___________________________________。
（1）菊花细胞；植物
（2）EcoRI 和 PstI；DNA 连接酶
（3）受伤的；叶片伤口处的细胞释放出大量酚类物质， 可吸引农杆菌移向这些细胞；不抗氨苄青霉素， 抗新霉素
（4）比较转基因和非转基因两种菊花的叶片细胞， 转基因菊花细胞中含有胰蛋白酶抑制剂基因、 胰蛋白酶抑制剂的 mRNA、 胰蛋白酶抑制剂
基因工程技术的基本步骤：
（1） 目的基因的获取： 方法有从基因文库中获取、 利用 PCR 技术扩增和人工合成；
（2） 基因表达载体的构建： 是基因工程的核心步骤， 基因表达载体包括目的基因、 启动子、 终止子和标记基因等；
（3） 将目的基因导入受体细胞： 根据受体细胞不同， 导入的方法也不一样． 将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、 基因枪法和花粉管通道法； 将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；
（4） 目的基因的检测与鉴定： 分子水平上的检测： ①检测转基因生物染色体的 DNA 是否插入目的基因--DNA 分子杂交技术； ②检测目的基因是否转录出了 mRNA--分子杂交技术； ③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术． 个体水平上的鉴定： 抗虫鉴定、 抗病鉴定、 活性鉴定等。
【详解】
（1） 该基因工程需要将胰蛋白酶抑制剂基因导入菊花细胞， 使菊花具有抗虫性， 所以受体细胞是菊花细胞， 属于植物基因工程。
（2） 目的基因的两端含有 EcoRI、 TthIII I、 PstI 三种限制酶的酶切位点， 为了避免目的基因自身环化，不能只用 EcoRI 这一种限制酶进行切割， 若用 EcoRI 和 TthIII I 切割目的基因， 相应的在对质粒进行切割时会将复制原点切去， 因此、 为使目的基因与质粒高效重组， 最好选用 EcoRI 和 PstI 作用于含目的基因的 DNA 和质粒， 然后在 DNA 连接酶的作用下形成重组质粒。
（3） 用农杆菌感染时， 应优先选用菊花受伤的叶片与含重组质粒的农杆菌共同培养， 选用这种叶片的理由是叶片伤口处的细胞释放出大量酚类物质， 可吸引农杆菌移向这些细胞； 重组质粒构建过程中用 EcoRI和 PstI 进行切割， PstI 会破坏氨苄青霉素抗性基因， 因此质粒上保留完整的标记基因是新霉素抗性基因，据此可知成功导入重组质粒的细胞会表现为不抗氨苄青霉素， 抗新霉素。
（4） 题意显示用转基因菊花叶片喂养某种菊花害虫， 发现害虫死亡率显著增加， 说明转基因菊花叶片中的目的基因成功表达出来胰蛋白酶抑制剂， 进而干扰昆虫代谢， 引起了昆虫死亡， 因此， 从分子水平可知转基因和非转基因菊花的叶片细胞的不同点是转基因菊花细胞中含有胰蛋白酶抑制剂基因、 胰蛋白酶抑制剂的 mRNA、 胰蛋白酶抑制剂。
菊花很美， 但其害虫较多， 利用基因工程培育抗虫菊花是害虫防治的有效手段。 胰蛋白酶抑制剂能干扰昆虫的代谢， 引起昆虫死亡， 但对人体无害。 科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因（Pin﹣ Ⅱ ）通过农杆菌导入菊花细胞， 培育成了抗虫菊花。 图 1 表示含目的基因的 DNA 分子， 图 2 表示质粒， 图中Ampr 表示氨苄青霉素抗性基因， Neor 表示新霉素抗性基因， 复制原点是质粒 DNA 复制的起点， 使其能在受体细胞中存在和遗传。 箭头表示识别序列完全不同的 4 种限制酶的酶切位点。 请回答下列有关问题：
（1） 上述基因工程中， 受体细胞是______________， 属于__________（填“动物”“植物”或“微生物”） 基因工程。
（2） 为使目的基因与质粒高效重组， 最好选用_______________（限制酶） 作用于含目的基因的 DNA 和质粒， 然后在___________的作用下形成重组质粒。
（3） 用农杆菌感染时， 应优先选用菊花___________（填“受伤的”或“完好的”） 叶片与含重组质粒的农杆菌共培养， 选用这种叶片的理由是_________________________________。 成功导入重组质粒的细胞会表现为______________________________。
（4） 用转基因菊花叶片喂养某种菊花害虫， 发现害虫死亡率显著增加。 试从分子水平写出转基因和非转基因菊花的叶片细胞的不同点： ___________________________________。
OKT3 为第一个用于临床的抗 T 细胞的单克隆抗体， 该抗体是针对 T 细胞上 CD3 抗原， 能抑制免疫系统的功能， 有利于器官移植， 回答下列问题：
（1） OKT3 的制备过程中所依据的生物学原理是________________， ________________。
（2） 制备 OKT3 时， 首先要将 OKT3 抗原注入小鼠体内， 以获得相应的______________， 该细胞和骨髓
瘤细胞杂交后要经过两次筛选， 最终获得的杂交瘤细胞具有 ___________________________的特点。
（3） OKT3 能作用于 T 细胞， T 细胞的功能受到影响时会导致小鼠体内的抗体合成量下降， 其原因是
_____________________________________________________________。
（4） 由于通常所用的 OKT3 单抗为鼠源性， 临床上可能产生免疫排斥反应， 因此可以对 OKT3 进行人工改造， 获得一种新型蛋白应用于人类， 该技术属于_______________工程， 该项工程是以蛋白质分子的结构和功能的关系， 通过_________________________， 对现有蛋白质进行改造。
中国科学家率先成功地应用体细胞对非人灵长类动物进行克隆， 获得两只克隆猴——“中中”和“华华”。 回答下列问题：
（1） “中中”和“华华”的获得涉及核移植过程， 核移植是指_____________。 哺乳动物的核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植， 胚胎细胞核移植获得克隆动物的难度____（填“大于”或“小于”） 体细胞核移植， 其原因是_________________。
（2）目前核移植技术中普通使用的去核方法是___________。 如果不刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下，还可以用 ___________________方法 。
（3） 用于核移植的供体细胞一般都选用传代 10 代以内的细胞， 为什么？ _____________。
（4） 如果用体细胞核移植方法生产的克隆猴—“中中”和“华华”是供体动物 100%的复制吗？___（是/否），为什么？ ________________________________________ 。
下列有关生物学实验的叙述， 正确的是
下列有关遗传与人类健康的叙述， 正确的是（ ）
下列关于细胞生命历程的叙述中， 正确的是（ ）
下列关于细胞器的描述正确的是（ ）
下列关于细胞及其产生的物质的叙述， 正确的是（ ）
下列有关物质跨膜运输的说法， 正确的是（ ）
1999 年，《科学》 杂志将干细胞的研究推举为 21 世纪最重要的研究领域之一， 经过近 20 年的努力， 科学家从分子水平发现干细胞中 c-Myc（原癌基因）、 Klf4（抑癌基因）、 Sox2 和 Oct-3/4 等基因处于活跃表达状态， 其中Oct-3/4 的精确表达对于维持干细胞的正常自我更新是至关重要的。 科学家利用逆转录病毒， 将 Oct-3/4、 Sox2、 c-Mye和 KIf4 四个关键基因转入高度分化的体细胞内， 让其重新变成一个多能干细胞（iPS 细胞）。 转化过程如下图所示，请据图回答问题：
（1） 健康人体的高度分化细胞中 Oct-3/4 基因处于______状态。
（2） 依据上图所示的原理， 细胞凋亡是 c-Myc、 Kl4、 Fas 等基因控制下的细胞_____的过程。 体细胞癌变是______等基因异常后表达的结果。
（3） 经过诱导高度分化的体细胞重新变成多能干细胞（iPS 细胞）， 若在体外培养这一批多能干细胞， 需要利用一定方法使细胞群体处于细胞周期的同一阶段， 这样的过程称为细胞周期同步化。
①如果采用 DNA 合成阻断法实现细胞周期同步化， 则需要在细胞处于对数生长期的培养液中添加适量的 DNA 合成可逆抑制剂， 处于__________期的细胞不受影响而继续细胞周期的运转， 最终细胞会停滞在细胞周期的__________期，以达到细胞周期同步化的目的。
②如果采用秋水仙素阻断法实现细胞周期同步化， 则需要在细胞处于对数生长期的培养液中添加适量的秋水仙素， 秋水仙素能够抑制________， 使细胞周期被阻断， 即可实现细胞周期同步化。
（4） 不同诱导因素使 iPS 细胞可以在体外分裂、 分化成多种组织细胞， 如图所示。 下列叙述错误的是（不定项选择）________
A． 各种组织细胞中的 DNA 和 RNA 与 iPS 细胞中的相同
B． iPS 细胞不断增殖分化， 所以比组织细胞更易衰老
C． iPS 细胞中的基因都不能表达时， 该细胞开始凋亡
D． 改变诱导因素能使 iPS 细胞分化形成更多类型的细胞
